Question

【題目】回答下列（一）、（二）小題：

（一）某同學(xué)用新鮮的泡菜濾液為實驗材料分離純化乳酸菌。分離純化所用固體培養(yǎng)基中因 含有碳酸鈣而不透明，乳酸菌產(chǎn)生的乳酸能溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣�；卮鹣铝袉栴}：

（1）泡菜腌制過程中起作用的主要是乳酸菌和____________。

（2）分離乳酸菌時，取適量的泡菜濾液用____________進行梯度稀釋，進行稀釋的理由是___________。與劃線分離相比，該種分離方法的優(yōu)點是___________。

（3）分離乳酸菌的培養(yǎng)基中加入碳酸鈣的作用是____________和中和產(chǎn)生的乳酸。應(yīng)挑選出___________的菌落作為候選菌。

（4）下列有關(guān)微生物培養(yǎng)的敘述正確的是__________

A．通常使用固體培養(yǎng)基對細菌進行擴大培養(yǎng) B．若培養(yǎng)基需要調(diào)節(jié) pH，應(yīng)該在滅菌后進行

C．用顯微鏡直接計數(shù)固體培養(yǎng)基中微生物數(shù)量 D．培養(yǎng)過程中倒置平板可防止菌落被冷凝水沖散

（二）油菜籽中蛋白質(zhì)和油脂的相對含量，與酶 1 和酶 2 對共同底物丙酮酸的競爭有關(guān)，酶 1促進蛋白質(zhì)的合成，酶 2 促進油脂的合成。某研究小組得到了含有基因 A 的油菜。回 答下列問題：

（1）構(gòu)建重組質(zhì)粒時，將基因 A 與 Ti 質(zhì)粒的控制質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)移的基因結(jié)合，這利用了該區(qū) 段可轉(zhuǎn)移至受體細胞，并整合到受體細胞____________上的特性。

（2）為實現(xiàn)重組質(zhì)粒的導(dǎo)入，一般情況下，需要用____________（物質(zhì)）處理農(nóng)桿菌。

（3）取田間生長的油菜下胚軸，先進行___________處理，然后接種到培養(yǎng)基中培養(yǎng)形成_______， 通過____________方法分散成單細胞，其依次經(jīng)歷____________、球形胚、心形胚和胚狀體，最后再生出完整的植株。

（4）已知基因 A 轉(zhuǎn)錄的 mRNA 能與酶 1 基因轉(zhuǎn)錄的 mRNA 互補配對。與普通油菜相比較，含基因 A 的油菜籽粒中的油脂含量會顯著____________。

Answer 1

【答案】假絲酵母 無菌水 在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的乳酸菌將被分散成單個細胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落 便于計數(shù) 利于乳酸菌的識別和分離 在平板上有溶鈣圈 D 染色體DNA Ca2+（或CaCl2） 消毒 愈傷組織 液體懸浮培養(yǎng) 細胞團 提高

【解析】

1、泡菜的制作原理：泡菜的制作離不開乳酸菌。在無氧條件下，乳酸菌將葡萄糖分解成乳酸。

2、接種微生物常用的兩種方法：①平板劃線法：通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面。②稀釋涂布平板法：將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進行培養(yǎng)。

3、據(jù)圖分析可知，①表示將目的基因?qū)�入受體細胞，②是通過再分化產(chǎn)生含有基因A的油菜幼苗。

（一）（1）泡菜腌制過程中起作用的主要是乳酸菌和假絲酵母。

（2）分離純化乳酸菌時，首先需要用無菌水對泡菜濾液進行梯度稀釋；進行梯度稀釋的理由是在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的乳酸菌將被分散成單個細胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落。與劃線分離相比，該種分離方法的優(yōu)點是便于計數(shù)。

（3）在分離純化所用的培養(yǎng)基中加入碳酸鈣的作用是中和乳酸菌代謝過程中產(chǎn)生的乳酸和利于乳酸菌的識別和分離；分離純化所用固體培養(yǎng)基中因含有碳酸鈣而不透明，乳酸菌產(chǎn)生的乳酸能溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣。因此，分離純化時應(yīng)挑選出在平板上有溶鈣圈的菌落作為候選菌。

（4）A、通常使用液體培養(yǎng)基對細菌進行擴大培養(yǎng)，A錯誤；

B、若培養(yǎng)基需要調(diào)節(jié)pH，應(yīng)該在滅菌前進行，B錯誤；

C、利用顯微鏡計數(shù)時只能用液體培養(yǎng)基，C錯誤；

D、倒置平板可防止培養(yǎng)基被滴落的冷凝水污染，D正確。

故選D。

（二）（1）構(gòu)建重組質(zhì)粒時，將基因 A 與 Ti 質(zhì)粒的控制質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)移的基因結(jié)合，這利用Ti 質(zhì)粒中的T-DNA可轉(zhuǎn)移并整合到受體細胞染色體DNA上的特性。

（2）為實現(xiàn)重組質(zhì)粒的導(dǎo)入，一般情況下，需要用Ca2+（或CaCl2）處理農(nóng)桿菌。

（3）取田間生長的油菜下胚軸，先進行消毒處理，然后接種到培養(yǎng)基中培養(yǎng)形成愈傷組織， 通過液體懸浮培養(yǎng)方法分散成單細胞，其依次經(jīng)歷細胞團、球形胚、心形胚和胚狀體，最后再生出完整的植株。

（4）已知轉(zhuǎn)錄時基因A的模板鏈與酶1基因的模板鏈互補。相對普通油菜，含基因A的油菜籽粒油脂含量顯著提高，其機理是：基因A轉(zhuǎn)錄的mRNA與酶1基因轉(zhuǎn)錄的mRNA互補，阻礙了酶1基因的mRNA翻譯，降低了酶1含量，酶2對丙酮酸的競爭增強，促進了油脂合成。