Question

【題目】產(chǎn)脂肪酶酵母可用于含油廢水處理。為篩選產(chǎn)脂肪酶酵母菌株，科研人員開展了相關(guān)研究。請回答下列問題：

（1）常規(guī)微生物實驗中，下列物品及其滅菌方法錯誤的是__________（填編號）。

編號	①	②	③	④
物品	培養(yǎng)基	接種環(huán)	培養(yǎng)皿	涂布器
滅菌方法	高壓蒸汽	火焰灼燒	干熱	臭氧

（2）稱取1．0g某土壤樣品，轉(zhuǎn)入99mL無菌水中，制備成菌懸液，經(jīng)__________后，獲得細胞密度不同的菌懸液。分別取0．1mL菌懸液涂布在固體培養(yǎng)基上，其中10倍稀釋的菌懸液培養(yǎng)后平均長出了46個酵母菌落，則該樣本中每克土壤約含酵母菌__________個。

（3）為了進一步提高酵母菌產(chǎn)酶能力，對分離所得的菌株，采用射線輻照進行__________育種。將輻照處理后的酵母菌涂布在以__________為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時間后，按照菌落直徑大小進行初篩，選擇直徑__________的菌落，純化后獲得A、B兩突變菌株。

（4）在處理含油廢水的同時，可獲得單細胞蛋白，實現(xiàn)污染物資源化。為評價A、B兩菌株的相關(guān)性能，進行了培養(yǎng)研究，結(jié)果如圖。據(jù)圖分析，應(yīng)選擇菌株__________進行后續(xù)相關(guān)研究，理由是__________。

Answer 1

【答案】④ 梯度稀釋 4．6×105（或460000） 誘變 脂肪（或油脂） 較大 B 該菌株增殖速度快，單細胞蛋白產(chǎn)量高；降解脂肪能力強，凈化效果好

【解析】

滅菌指用強烈的物理或化學(xué)方法殺滅所有微生物，包括致病的和非致病的，以及細菌的芽胞．常用滅菌方法：灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌法。高壓蒸汽滅菌適用于對一般培養(yǎng)基和玻璃器皿的滅菌，干熱滅菌適用于空玻璃器皿的滅菌，微生物接種時的金屬接種工具和試管口可以用灼燒滅菌。稀釋平板計數(shù)是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的單個菌落，即是由一個單細胞繁殖而成這一培養(yǎng)特征設(shè)計的計數(shù)方法，即一個菌落代表一個單細胞。將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋程度的菌液分別涂布到固體培養(yǎng)基的表面，使其均勻分布于平板中的培養(yǎng)基內(nèi)，經(jīng)培養(yǎng)后，由單個細胞生長繁殖形成菌落，統(tǒng)計菌落數(shù)目，即可計算出樣品中的含菌數(shù)。

（1）培養(yǎng)基一般進行高壓蒸汽滅菌，接種環(huán)可用火焰灼燒滅菌，培養(yǎng)皿一般通過干熱滅菌，涂布器應(yīng)該用酒精引燃滅菌；故①②③正確，錯誤的是④。

（2）稀釋涂布平板法是將樣品進行一系列梯度稀釋后，獲得細胞密度不同的菌懸液，然后涂布到平板上。根據(jù)題意，1.0g土壤樣品轉(zhuǎn)入99mL無菌水中，制備成菌懸液，經(jīng)系列梯度稀釋后，分別取0.1mL菌懸液涂布在固體培養(yǎng)基上，則稀釋的倍數(shù)為1000倍，其中10倍稀釋的菌懸液培養(yǎng)后長出了46個酵母菌落，則總的稀釋倍數(shù)為10000倍，故每克土壤中含酵母菌數(shù)為46×10000=4.6×105個。

（3）根據(jù)題意，欲提高酵母菌產(chǎn)酶能力，可對分離得到的產(chǎn)脂肪酶酵母菌菌株進行射線輻射，該育種方式為誘變育種。為了能篩選出符合要求的產(chǎn)脂肪酶酵母菌突變株，可配制以脂肪為唯一碳源的培養(yǎng)基，將輻射處理的酵母菌涂布在該固體培養(yǎng)基上，形成單菌落；產(chǎn)脂肪酶能力越強的酵母菌，分解利用脂肪的能力越強，菌落生長越好，一段時間后，按照菌落直徑大小進行初篩，選取直徑較大的菌落即可。

（4）據(jù)題圖分析可知，相同時間內(nèi)，菌株B的細胞密度高于菌株A，而菌株B的脂肪剩余量低于菌株A的脂肪剩余量，故進行相關(guān)研究可選擇菌株B，原因是菌株B增殖速度快，單細胞蛋白的產(chǎn)量也高，同時降解脂肪的能力強，凈化效果更好。