Question

【題目】為增加油菜種子的含油量，研究人員從陸地棉中獲取酶D基因，從擬南芥基因文庫中獲取轉運肽基因：

（1）在________________酶處理后可得到___________端（填圖中字母）相連的融合基因。

（2）將上述融合基因插入如圖所示Ti質粒的T-DNA中，構建______________并導入農桿菌中。融合基因在農桿菌中無法表達所需產物的原因可能是__________。

（3）為實現(xiàn)有效表達，科研人員用農桿菌提取液浸染油菜細胞獲得轉基因細胞。在___________條件下，將轉基因細胞接種在固體培養(yǎng)基上，經_________和_________形成轉基因油菜。此過程除營養(yǎng)物質外還必須向培養(yǎng)基中添加_______________。

Answer 1

【答案】ClaⅠ（限制酶）和DNA連接 A、D 表達載體（或“重組質粒”） 融合基因選自真核生物，有內含子，在農桿菌中，其初始轉錄產物中與內含子對應的RNA序列不能被切除 無菌條件 脫分化 再分化 植物激素

【解析】

在已知序列的情況下，可用化學方法人工合成獲取酶D基因（或PCR擴增）。由題圖中酶D基因和轉運肽基因都有ClaI酶切位點，可用ClaI酶切割酶D基因的A端和轉運肽基因的D端，再用DNA連接酶將其連成融合基因 。

（1）用ClaI酶切割酶D基因的A端和轉運肽基因的D端，再用DNA連接酶將其連接為A、D端相連的融合基因。

（2）將融合基因插入Ti質�？尚纬芍亟M質粒或者重組DNA；融合基因在農桿菌中無法表達所需產物的原因可能是：融合基因選自真核生物，有內含子，在農桿菌中，其初始轉錄產物中與內含子對應的RNA序列不能被切除。

（3）為實現(xiàn)有效表達，科研人員用農桿菌提取液浸染油菜細胞獲得轉基因細胞。在無菌條件下，將轉基因細胞接種在固體培養(yǎng)基上，經脫分化和再分化形成轉基因油菜。此過程除營養(yǎng)物質外還必須向培養(yǎng)基中添加植物激素。