Question

【題目】下面是口蹄疫疫苗生產(chǎn)過(guò)程示意圖，請(qǐng)據(jù)圖回答下列問(wèn)題：

(1)首先從口蹄疫病毒中提取部分合成病毒蛋白的RNA，而不是用口蹄疫病毒的全部RNA，原因是合成病毒蛋白的RNA控制合成的病毒蛋白質(zhì)，具有__________________特性，又不會(huì)使動(dòng)物致病。以合成病毒蛋白的RNA產(chǎn)生病毒蛋白的DNA，需用到的工具酶是______________________________________。

(2)構(gòu)建基因表達(dá)載體所需要的工具酶是________________�；�因表達(dá)載體除目的基因外，還應(yīng)包括________________________。

(3)導(dǎo)入大腸桿菌前需先將大腸桿菌處理為________細(xì)胞。

(4)為檢測(cè)目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞，常常要借助載體上________的表達(dá)，更準(zhǔn)確的方法是利用放射性同位素標(biāo)記的________作探針與基因組DNA雜交。最后還要檢測(cè)目的基因是否翻譯成了病毒蛋白質(zhì)，利用的技術(shù)是______________。

Answer 1

【答案】 抗原 逆轉(zhuǎn)錄酶 限制性核酸內(nèi)切酶 DNA連接酶 啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因 感受態(tài) 標(biāo)記基因 病毒蛋白基因(目的基因) 抗原—抗體雜交技術(shù)

【解析】試題分析：圖示表示利用轉(zhuǎn)基因番茄來(lái)生產(chǎn)口蹄疫疫苗，而口蹄疫病毒的遺傳物質(zhì)為RNA，因此要獲得目的基因必須使用逆轉(zhuǎn)錄的方法獲得�；�因工程的過(guò)程包括：目的基因的獲取、目的基因與運(yùn)載體重組、目的基因?qū)�入受體細(xì)胞、目的基因的檢測(cè)與表達(dá)。

（1）病毒由核酸和蛋白質(zhì)組成，其蛋白質(zhì)外殼為抗原，具有免疫特性，故口蹄疫疫苗生產(chǎn)過(guò)程只需提取口蹄疫病毒中控制合成病毒蛋白的RNA部分，以RNA為模板合成DNA的過(guò)程屬于逆轉(zhuǎn)錄，需要逆轉(zhuǎn)錄酶。

（2）基因表達(dá)載體的組成：目的基因、啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因。構(gòu)建基因表達(dá)載體一般用一定的限制酶切割質(zhì)粒，使其出現(xiàn)一個(gè)有黏性末端的切口，再用同種限制酶切割目的基因，產(chǎn)生相同的黏性末端。將切下的目的基因片段，插入質(zhì)粒的切口處，在DNA連接酶的作用下使質(zhì)粒與目的基因結(jié)合形成重組質(zhì)粒。

（3）將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞前，常用Ca2+處理使其成為感受態(tài)細(xì)胞。

（4）標(biāo)記基因的表達(dá)可檢測(cè)目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞，除此之外還可以用DNA雜交法和抗原—抗體雜交技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，其中最準(zhǔn)確的是DNA分子雜交分，即利用放射性同位素標(biāo)記的病毒蛋白基因作探針與基因組DNA雜交。