Question

【題目】PCR技術(shù)現(xiàn)在已經(jīng)應(yīng)用到臨床診斷、法醫(yī)鑒定、分子生物學(xué)、農(nóng)牧業(yè)等領(lǐng)域。下圖為某同學(xué)實驗中，所用引物與模板配對情況（DNA聚合酶能夠從引物的3ˊ端開始連接脫氧核苷酸）。下列說法正確的是（ ）

A.若用引物Ⅱ和Ⅲ進行該DNA分子擴增可獲得5種序列不同的產(chǎn)物

B.復(fù)性溫度過高導(dǎo)致引物不能與模板牢固結(jié)合，PCR擴增效率下降

C.設(shè)計以上引物時需要避免引物之間形成堿基互補配對造成引物自連

D.為方便構(gòu)建基因表達載體，可在引物中增加限制性核酸內(nèi)切酶位點

Answer 1

【答案】ABCD

【解析】

PCR技術(shù)：

（1）概念：PCR全稱為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是一項在生物體外復(fù)制特定DNA的核酸合成技術(shù)。

（2）原理：DNA復(fù)制。

（3）前提條件：要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一對引物。

（4）條件：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）

（5）過程：高溫變性：DNA解旋過程（PCR擴增中雙鏈DNA解開不需要解旋酶，高溫條件下氫鍵可自動解開）；低溫復(fù)性：引物結(jié)合到互補鏈DNA上；中溫延伸：合成子鏈。

A、若用引物Ⅱ和Ⅲ進行擴增，因新形成的DNA子鏈中，有的含有與引物Ⅱ互補配對的堿基序列，有的含有與引物Ⅲ互補配對的堿基序列，則至少在連續(xù)擴增3次后可以獲得5種序列不同的產(chǎn)物，A正確；

B、PCR技術(shù)中，復(fù)性是指引物結(jié)合到互補DNA鏈。復(fù)性溫度過高會引起堿基之間的氫鍵斷裂，導(dǎo)致引物不能與互補DNA鏈（模板）牢固結(jié)合，DNA擴增效率下降，B正確；

C、設(shè)計以上引物時需要避免引物之間形成堿基互補配對造成引物自連，C正確；

D、構(gòu)建基因表達載體時可在引物中增加限制性核酸內(nèi)切酶位點，D正確。

故選ABCD。