Question

【題目】中國苦蕎富含黃酮類化合物等營養(yǎng)物質(zhì)，在降血糖、降血脂等方面功效顯著．查爾酮合成酶（CHS）是黃酮類化合物合成的關(guān)鍵酶，如圖為將修飾后的CHS基因?qū)肟嗍w，培育高產(chǎn)黃酮苦蕎品系示意圖．

（1）要對培養(yǎng)基徹底滅菌應采用的滅菌方法是__．接種前，用滅菌后未接種的培養(yǎng)基培養(yǎng)一段時間，觀察是否形成菌落，目的是__．

（2）接種前，外植體用__和0.1%的氯化汞溶液進行消毒后都需經(jīng)無菌水清洗．接種后2﹣5天，若發(fā)現(xiàn)外植體邊緣局部污染，原因可能是__．

（3）過程②叫做__，通過②和③過程能成功地把離體的苦蕎體細胞能培育成植株，此技術(shù)所利用的原理是__．

（4）判斷轉(zhuǎn)基因苦蕎培育是否成功，可比較轉(zhuǎn)基因苦蕎與普通苦蕎的黃酮類化合物含量，也可通過凝膠色譜法分離測定細胞中CHS含量，由于CHS__，所以最先從色譜柱中洗脫出來，工業(yè)化生產(chǎn)中，可利用__技術(shù)以提高CHS的利用率而節(jié)約成本．

Answer 1

【答案】 高壓蒸汽滅菌 判斷培養(yǎng)基滅菌是否徹底 70%的酒精 外植體消毒不徹底 脫分化 植物細胞的全能性 相對分子量大 固定化酶（固定化細胞）

【解析】基因工程的基本操作步驟主要包括四步：①目的基因的獲��；②基因表達載體的構(gòu)建；③將目的基因?qū)胧荏w細胞；④目的基因的檢測與鑒定．其中構(gòu)建基因表達載體是基因工程的核心步驟，需要限制酶和DNA連接酶。植物組織培養(yǎng)技術(shù)包括脫分化和再分化兩個重要過程，而決定植物脫分化和再分化的關(guān)鍵因素是植物激素的種類和比例，特別是生長素和細胞分裂素的協(xié)同作用在組織培養(yǎng)過程中非常重要。

（1）培養(yǎng)基徹底滅菌常用的方法是高壓蒸汽滅菌法；為了判斷培養(yǎng)基滅菌是否徹底，接種前應該用滅菌后未接種的培養(yǎng)基培養(yǎng)一段時間，觀察是否形成菌落。

（2）外植體是植物組織培養(yǎng)的對象，應該用70%的酒精進行消毒；若接種后2-5天，發(fā)現(xiàn)外植體邊緣局部污染，原因可能是外植體消毒不徹底。

（3）圖中過程②表示脫分化形成愈傷組織的過程；③過程表示再分化，通過②和③過程將離體的苦蕎體細胞培育成完整植株的技術(shù)是植物組織培養(yǎng)技術(shù)，該技術(shù)的原理是植物細胞的全能性。

（4）通過凝膠色譜法分離測定細胞中CHS含量時，由于CHS相對分子量大，所以最先從色譜柱中洗脫出來；工業(yè)化生產(chǎn)中，可利用固定化酶（或固定化細胞）技術(shù)以提高CHS的利用率而節(jié)約成本。